防止與減少冰晶的方法

?樣本取材宜新鮮，盡量保持干燥

取材時組織樣本保持干燥，不要接觸水，必要時用PBS清洗。冷凍之前用濾紙或紗布吸去組織上多余的水分。樣本盡量不要用液體浸泡，浸泡后，組織內(nèi)水分會增加，容易造成冰凍后冰品形成。

?樣本組織的大小和厚度

組織的厚度決定著速凍的時間，如果太厚，會導(dǎo)致標(biāo)本的表面還沒有冷凍，而貼近速凍臺的一面溫度已經(jīng)太冷。在不影響實驗結(jié)果的前提下，標(biāo)本取材盡量小一些，控制在1.5cmx15cmx0.3cm，厚度不超過4mm，這樣有利于組織的快速凍結(jié)，并將組織塊盡快移到冷凍頭上驟冷，以縮短冷凍時間。

?提前開機做好預(yù)冷

避免由于緩慢冷凍而產(chǎn)生冰品，宜提前開冰切機做好預(yù)冷。將冰凍切片機的溫度降至-20℃~-25℃。一般將冷凍箱溫度降至-25℃℃，冷凍頭溫度降至-30℃。

?保持刀具與臺面的干燥

取材時盡量保持刀具與臺面的干燥，避免組織與水接觸，如送檢組織內(nèi)含水或血性液體，應(yīng)用干的紗布或濾紙把水分吸干后再行冷凍。

?單獨OCT包埋劑包埋和速凍

樣品托放上速凍臺，加入少量OCT包埋劑，待底部變白但表面未凝固時放上組織樣本，適當(dāng)加蓋少量包埋劑，加冷凍錘速凍組織(注意保持組織冷凍切面的水平)。這樣既可以提高冷凍速度，又可以避免接觸空氣后產(chǎn)生干、濕影響。

?冰凍切片厚度適中

冰凍切片不能太薄，一般≧6um，6um的片子可以有更多的空間避免風(fēng)干假象，也會減少冰晶所造成的細(xì)胞核空洞。